磷鎢酸負(fù)染色
磷鎢酸負(fù)染色又稱(chēng)磷鎢酸陰性染色,是相對(duì)于普通染色(稱(chēng)正染色)而言的。負(fù)染色技術(shù)是一種製備電子顯微鏡樣品圖像呈現(xiàn)複反差的技術(shù),用於觀(guān)察樣品中的顆粒性物質(zhì)或生物大分子。用金屬鹽對(duì)鋪展在載網(wǎng)上的樣品進(jìn)行染色,使整個(gè)載網(wǎng)都鋪上一層重金屬鹽,而有凸出顆粒的地方則沒(méi)有染料沉積。染色後,在電鏡下觀(guān)察時(shí),被觀(guān)察的對(duì)象為亮的,背景為暗的。
磷鎢酸負(fù)染色首先由Hall在1955年提出,Hall在病毒研究中用磷鎢酸染色後,發(fā)現(xiàn)圖像的背景很暗,而病毒象一個(gè)亮晶的"空洞"被清楚地顯示出來(lái)。在超薄切片的染色中,染色後的樣品電子密度因染色而被加強(qiáng),在圖像中呈現(xiàn)黑色。
磷鎢酸負(fù)染色液
磷鎢酸負(fù)染色液是一種生物染色液,有多種不同規(guī)格,包括磷鎢酸負(fù)染色液(2%)、磷鎢酸負(fù)染色液(3%)和磷鎢酸負(fù)染色液(5%)等。
磷鎢酸負(fù)染原理
磷鎢酸負(fù)染原理是用重金屬鹽——磷鎢酸對(duì)鋪展在載網(wǎng)上的樣品進(jìn)行染色;吸去染料,樣品乾燥後,樣品凹陷處鋪了一薄層重金屬鹽,而凸的出地方則沒(méi)有染料沉積,從而出現(xiàn)負(fù)染效果。
磷鎢酸負(fù)染液配製
磷鎢酸負(fù)染液的配製通常以鎢酸鈉和磷酸為原料制得,並且要加酸化劑氫氯酸HCl,用雙蒸水或磷酸緩衝液配製成1%~3%的溶液,使用時(shí)應(yīng)用1mol/L氫氧化鈉溶液將磷鎢酸負(fù)染色液的pH值調(diào)至6.4~7.0或?qū)嶒?yàn)所需的值。
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